糖尿病肾病（ diabetic nephropathy ， DN ）是 2 型糖尿病（ type 2 diabetes ， T2DM ）最常见且最严重的并发症之一，是终末期肾脏疾病（ end stage renal disease ， ESRD ）的主要原因 [1] 。在 2017 年因 DN 死亡的人约为 219 451 ，从 1990 年开始呈现稳定增长趋势 [2] ，到 2035 年，全球范围内 35% ～ 40% 的 T2DM 会发展为 DN[3] ，这给家庭和社会带来严重的经济及心理负担。目前，治疗 DN 并没有特定药物，主要通过控制血糖和血压来降低发生 ESRD 的风险，但并不能长期阻止 DN 的进展。因此，寻求改善糖尿病肾病的方法具有重要意义。

　　中药长期应用于糖尿病及其并发症的治疗，具有不良反应少、安全性高等特点。当归是临床上治疗 DN 的方剂中最常用的中药之一，并且具有良好的临床疗效。当归多糖作为当归的主要活性成分，具有改善贫血、抗肿瘤、免疫调节、降血糖、调血脂 [4] 、治疗糖尿病肾病 [5] 的药理作用，可以改善 DN 。当归多糖是天然植物提取物，具有多途径、多靶点、成分稳定等优点，能够通过多种机制作用于疾病，因此将当归多糖开发为治疗 DN 的药物具有良好的前景。但当归多糖对 DN 的疗效和潜在机制尚不完全清楚，还需进行多层次的研究。

　　肾脏中含有丰富的线粒体，是线粒体含量第二高的器官 [6-7] 。越来越多的研究表明，线粒体功能障碍在糖尿病肾脏疾病的发病机制中起着重要作用 [8] 。线粒体质量控制的缺失会导致线粒体功能障碍，因此维持线粒体稳态和质量控制对 DN 至关重要。线粒体质量控制中重要的一个环节就是线粒体自噬，通过选择性的清除受损或多余的线粒体，从而保护正常的线] 。目前许多研究发现，调控线粒体自噬能改善 DN ，是防治 DN 的重要作用机制之一 [10-11] 。线粒体自噬由 PTEN 诱导的蛋白激酶 1 （ PTEN induced putative kinase 1 ， PINK1 ） / Parkin 通路和线粒体自噬受体信号通路介导 [11] ，磷酸腺苷激活的蛋白激酶（ AMP-activated protein kinase ， AMPK ）为线粒体代谢和线粒体自噬的关键参与者 [12-13] 。本研究通过观察当归多糖在 DN 中的作用，探索当归多糖在 KK-Ay 小鼠 T2DM 模型中与 AMPK 介导的线粒体自噬相关的潜在机制。

　　SPF 级雄性 KK-Ay 小鼠 50 只、 C57BL/6J 小鼠 10 只， 10 ～ 12 周龄，体质量（ 38 ± 2 ） g ，均购自北京华阜康生物科技有限公司，许可证号 SCXK （京） 2019-0008 。高糖高脂饲料、普通小鼠饲料购自甘肃中医药大学实验动物中心。动物饲养于甘肃中医药大学实验动物中心，每 5 只为一笼，昼夜循环，充分保证小鼠的适宜活动空间，每周更换 2 次笼内垫料，确保小鼠生存环境的洁净，室内温度为 26.7 ℃，自由进食饮水。动物实验经甘肃中医药大学动物伦理委员会批准（批准号 2021-368 ）。

　　小鼠模型建立、分组及给药小鼠适应性喂养 1 周，取 10 只 C57BL/6J 小鼠作为正常组，以普通饲料喂养； 50 只 KK-Ay 小鼠用高糖高脂饲料喂养。 KK-Ay 小鼠是 T2DM 的自发动物模型，随机监测小鼠血糖， KK-Ay 小鼠随机血糖≥ 13.9 mmol/L ，出现微量蛋白尿，即视为成功构建 DN 模型 [14-15] 。将造模成功的 KK-Ay 小鼠随机分为模型组、厄贝沙坦（ 25 mg/kg ）组和当归多糖高、中、低剂量（ 400 、 200 、 100 mg/kg ，根据人和动物体表面积等效剂量比率表计算 [16] ）组，每组 10 只。各给药组 ig 相应药物，正常组和模型组 ig 等体积生理盐水， 1 次 /d ，连续 4 周。

　　末次给药后，收集小鼠 24 h 尿液，于 −20 ℃保存待测；小鼠禁食不禁水 12 h 后， ip 10% 水合氯醛，行心脏采血， 4 ℃、 3500 r/min 离心 10 min ，分离血清， −80 ℃保存备用。快速分离两侧肾脏，左肾置于 4% 多聚甲醛中，室温固定备用；右肾纵向切开去除肾髓质， −80 ℃保存备用。

　　观察小鼠皮毛的光泽度、活动度、精神状态及进食情况等。按照试剂盒说明书检测 U-ALB 、 SCr 、 BUN 水平。

　　染色观察肾脏组织病理学变化取出固定在 4% 多聚甲醛中的肾组织，经脱水、浸蜡、包埋后，将包埋好的蜡块切成薄片，然后进行 HE 染色，于显微镜下观察并拍照。

　　结果采用 SPSS 21 统计软件分析，数据资料用 表示，组间两两比较采用 t 检验，多组间比较采用单因素方差分析。

　　实验期间，模型组出现多饮多食、皮毛枯槁易 脱落、蜷缩懒动等现象，甚至出现皮肤溃疡等并发症。各给药组小鼠症状和体征较模型组有明显改善。3.2 当归多糖 对

　　小鼠肾功能的影响如表 2 所示，与对照组比较，模型组 U-ALB 、 SCr 、 BUN 水平均明显升高（ P ＜ 0.01 ）；与模型组比较，厄贝沙坦组和当归多糖高、中剂量组 U-ALB 、 SCr 、 BUN 水平均明显降低（ P ＜ 0.05 、 0.01 ），且呈剂量相关性。

　　如图 1 所示，对照组肾组织结构清晰完整，细胞大小均一，肾小管排列紧密，基底膜完整，未见炎性细胞浸润；与对照组比较，模型组肾小管壁出现大量空泡样变性，肾组织排列疏松，出现间隙，结构紊乱，肾小球出现萎缩，出现炎性细胞浸润；与模型组比较，厄贝沙坦组细胞排列紊乱，肾小管依然有较多空泡，且组织内有出血现象，肾小球基底膜损伤，肾小球萎缩；当归多糖各剂量组细胞排列逐渐紧密，空泡样变性明显减少，肾小管排列整齐，肾小球逐渐恢复大小，肾小管壁逐渐完整，出血现象减少，且呈剂量相关性。

　　蛋白表达的影响如图 2 所示，与对照组比较，模型组小鼠肾组织 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ 、 Nix 蛋白表达水平均显著升高（ P ＜ 0.01 ）， p62 蛋白表达水平显著降低（ P ＜ 0.01 ）；与模型组比较，厄贝沙坦组和当归多糖高剂量组 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ 蛋白表达水平显著降低（ P ＜ 0.01 ），厄贝沙坦组和当归多糖低、高剂量组 Nix 蛋白表达水平显著降低（ P ＜ 0.01 ），各给药组 p62 蛋白表达水平显著升高（ P ＜ 0.01 ）。3.5 当归多糖 对

　　如图 3 所示，与对照组比较，模型组小鼠肾组织 Drp1 蛋白表达水平显著升高（ P ＜ 0.01 ）；与模型组比较，厄贝沙坦组和当归多糖高、中剂量组 Drp1 蛋白表达水平显著降低（ P ＜ 0.01 ）。

　　如表 3 所示，与对照组比较，模型组小鼠肾组织 AMPK 、 mTOR mRNA 表达水平均显著升高（ P ＜ 0.01 ）；与模型组比较，各给药组小鼠肾组织 AMPK 、 mTOR mRNA 表达水平均显著降低（ P ＜ 0.01 ）。3.7 当归多糖 对

　　如图 4 和表 4 所示，与对照组比较，模型组小鼠肾组织中 AMPK 、 mTOR 蛋白表达水平均显著升高（ P ＜ 0.01 ）；与模型组比较，厄贝沙坦组和当归 多糖中、高剂量组 AMPK 、 mTOR 蛋白表达水平均显著降低（ P ＜ 0.05 、 0.01 ）。

　　自发性 T2DM 动物模型 KK-Ay 小鼠在 8 ～ 20 周龄中表现出 DN ，其肾小球的病理变化与人类 DN 的早期阶段一致 [17] ，因此 KK-Ay 小鼠被认为是研究 DN 的合适动物实验模型。根据中医理论，气虚血瘀是 DN 的常见证型，随着病情的发展，会出现阴血亏虚、瘀血阻滞，因此，补血活血化瘀是中医治疗 DN 的关键。当归具有补血活血的功效，是治疗 DN 的常用中药。当归的活性成分当归多糖具有改善 DN 的疗效 [18-19] ，但是具体机制并不完全清楚。

　　在 DN 大鼠模型中，当归多糖可降低肾组织中炎性指。